МЕТОДОЛОГИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ БЕЛКОВО-ПЕПТИДНЫХ КОМПОНЕНТОВ ЭКСТРАКТОВ ТКАНЕЙ SUS SCROFA


https://doi.org/10.21323/2414-438X-2017-2-3-79-85

Полный текст:


Аннотация

В данной статье приведены данные сравнительного анализа четырех методов количественной оценки содержания белково-пептидных комплексов в  экстрактах, полученных на основе сырья животного происхождения, а  также низкомолекулярных и высокомолекулярных фракциях экстракта: прямого спектрофотометрического определения при длинах волн 260 и 280 нм с последующим расчетом по формуле Калькара; биуретовой реакции по методу Кингслея — Вейксельбаума; с использованием реактива Брэдфорда и по стандартному методу Лоури. Анализ полученных экспериментальных данных показал, что в  случае с  экстрактом, содержащим белково-пептидные комплексы в  различном диапазоне молекулярных масс наиболее качественно показывает концентрацию белка метод Кингслея-Вейксельбаума, при исследовании высокомолекулярной фракции (более 30 кДа) больше информации возможно получить при сочетании спектрофотометрического метода и также метода Кингслея-Вейксельбаума. Низкомолекулярные (менее 30 кДа) фракции следует исследовать комплексно, с  применением спектрофотометрического метода, методов Лоури и  Брэдфорда. Данные методы дают возможность предположительно оценить диапазоны размеров белковых молекул (по числу пептидных связей), а также определить наличие гидрофобных и ароматических аминокислот.

Об авторах

Екатерина Романовна Василевская
Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН
Россия
младший научный сотрудник Экспериментальной клиники-лаборатории биологически активных веществ животного происхождения, Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН 109316, г.Москва, ул. Талалихина, 26 Тел.: +7–495–676–92–11


Елена Александровна Котенкова
Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН
Россия
кандидат технических наук, научный сотрудник Экспериментальной клиники-лаборатории биологически активных веществ животного происхождения, Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН 109316, г.Москва, ул. Талалихина,26 Тел.: +7–495–676–92–11


Екатерина Александровна Лукинова
Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН
Россия
старший лаборант Экспериментальной клиники-лаборатории биологически активных веществ животного происхождения, Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН 109316, г.Москва, ул. Талалихина,26 Тел.: +7–495–676–92–11


Евгения Андреевна Калинова
Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН
Россия
старший лаборант Экспериментальной клиники-лаборатории биологически активных веществ животного происхождения, Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН 109316, г.Москва, ул. Талалихина,26 Тел.: +7–495–676–92–11


Список литературы

1. Noble, J.E. Quantitation of protein/ J. E. Noble, M.J. Bailey//Methods Enzymol.— 2009. — V. 463. — P. 73–95. DOI: 10.1016/S0076–6879(09)63008–1

2. Brady, P.N. Evaluation of Colorimetric Assays for Analyzing Reductively Methylated Proteins: Biases and Mechanistic Insights/P.N. Brady, M.A. Macnaughtan //Analytical biochemistry.— 2015. — V.491. — P. 43–51. DOI: 10.1016/j.ab.2015.08.027

3. Lanouette, S. The functional diversity of protein lysine methylation/S. Lanouette, V. Mongeon, D. Figeys, J.F. Couture //MolSyst Biol.— 2014. — V. 10. — P. 1–26.

4. Gordon, M.A.R. A comparison of two colorimetric assays, based upon Lowry and Bradford techniques, to estimate total protein in soil extracts / M.A.R. Gordon, E. Armenise, R.P. White, P.R. Hirsch, K.W.T. Goulding// Soil BiolBiochem.— 2013. — V. 67(100). — P. 166–173.

5. Olson, B. Assays for determination of protein concentration/B.Olson, J. Markwell//CurrProtoc Protein Sci.— 2007. — Unit 3.4.

6. Jian, W. A workflow for absolute quantitation of large therapeutic proteins in biological samples at intact level using LCHRMS/ W.Jian, L.Kang, L. Burton, N. Weng // Bioanalysis.—2016. — V. 8. P. 1679–91.

7. Larda, S.T. Lysine methylation strategies for characterizing protein conformations by NMR/ S.T. Larda, M.P. Bokoch, F. Evanics, R.S. Prosser//J Biomol NMR. — 2012. — V. 54. — P. 199–209.

8. Georgiou, C.D. Mechanism of Coomassie brilliant blue G‑250 binding to proteins: A hydrophobic assay for nanogram quantities of proteins/ C.D. Georgiou, K.Grintzalis, G. Zervoudakis, I. Papapostolou // Anal Bioanal Chem.— 2008. — V. 391. — P. 391–403.

9. Whiffen, L.K. Polyphenolic compounds interfere with quantification of protein in soil extracts using the Bradford method/L.K. Whiffen, D.J. Midgley, P.A. McGee //Soil BiolBiochem.—2007. — V. 39(2). — P. 691–694.

10. Вавилова, Т.П. Сравнительный анализ содержания белков в костной ткани верхней и нижней челюстей / Т.П. Вавилова, В.А. Китаев, А.В. Пушкина, С.В. Шишкин // Вятский медицинский вестник.— 2007.— № 4.

11. Roberson, K.J. Review of methods to assign the nuclear magnetic resonance peaks of reductively methylated proteins/K.J. Roberson, M.A. Macnaughtan // Anal Biochem. — 2014. — V. 466. — P. 76–82.

12. Fedulova L.V. Influence of Different Polypeptides Fractions Derived from Sus Scrofa Immune Organs on the Rats Immunological Reactivity/ L.V. Fedulova, Е.R. Vasilevskaya,, Е.А. Kotenkova, A.A. Elkina, M.G. Baryshev, A.B. Lisitsyn //Journal of Pharmacy and Nutrition Sciences.— 2017.— № 7. — Р. 35–40.

13. Krohn, R. I. The Colorimetric Detection and Quantitation of Total Protein // Current Protocols in Cell Biology. — 2002. — V. 15. — P. 3H: A.3H.1–A.3H.28. DOI: 10.1002/0471143030.cba03hs15

14. Reichelt, W. Bioprocess monitoring: minimizing sample matrix effects for total protein quantification with bicinchoninic acid assay/W. Reichelt, D. Waldschitz, C. Herwig, L. Neutsch// J IndMicrobiolBiotechnol.— 2016. — V. 43. — P. 1271–80.

15. Ku, H.K. Interpretation of protein quantitation using the Bradford assay: comparison with two calculation model/ H.K. Ku, H.M. Lim, K.H. Oh, H.J. Yang, J.S. Jeong, S.K. Kim// Anal Biochem.— 2013. — V. 434(1). — P. 178–180.

16. Василевская, Е.Р. Влияние изотопного состава воды на экстракцию биоактивных соединений / Е.Р. Василевская, Л.В. Федулова, Е.А Котенкова., А.П.Даньшина // Все о мясе.— 2016.— № 6. — С. 42–45.

17. Simonian, M.H. Quantitation of proteins/ M.H. Simonian, J.A. Smyth// Protocols in Molecular Biology, supplement 76.—2006. — P. 10.1A1–10.1A9.

18. Janairo, G.Determination of the Sensitivity Range of Biuret Test for Undergraduate Biochemistry Experiments/ G.Janairo, M. L.Sy, L.Yap, N.Llanos-Lazaro, J. Robles //Journal of Science & Technology.— 2011. — V.5(6). — P. 77–83.

19. Lu, T. S. Interpretation of biological and mechanical variations between the Lowry versus Bradford method for protein quantification/ T. S. Lu, B. S. Yiao, M. D. Kenneth, R. V. Jensen, L. Hsiao // North American Journal of Medical Sciences. — 2010. — V. 2(7). — P. 325–328.

20. Waterborg, J. H. The Lowry Method for Protein Quantitation//The Protein Protocols Handbook.— 2009. — V.32. — P. 7–10.

21. Okutucu, B. Comparison of five methods for determination of total plasma protein concentration/B.Okutucu, A. Dınçer, Ö. Habib, F.Zıhnıoglu // Journal of Biochemical and Biophysical Methods.— 2007. — V. 70(5). — P. 709–711.


Дополнительные файлы

Для цитирования: Василевская Е.Р., Котенкова Е.А., Лукинова Е.А., Калинова Е.А. МЕТОДОЛОГИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ БЕЛКОВО-ПЕПТИДНЫХ КОМПОНЕНТОВ ЭКСТРАКТОВ ТКАНЕЙ SUS SCROFA. Теория и практика переработки мяса. 2017;2(3):79-85. https://doi.org/10.21323/2414-438X-2017-2-3-79-85

For citation: Vasilevskaya E.R., Kotenkova E.A., Lukinova E.A., Kalinova E.A. RESEARCH METHODOLOGY OF SUS SCROFA TISSUE EXTRACTS PROTEIN-PEPTIDE COMPONENTS. Theory and practice of meat processing. 2017;2(3):79-85. (In Russ.) https://doi.org/10.21323/2414-438X-2017-2-3-79-85

Просмотров: 346

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2414-438X (Print)
ISSN 2414-441X (Online)